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超声波破碎仪在破碎大肠杆菌时的技巧
发布时间:2019-11-27   点击次数:156次

超声波破碎仪在破碎大肠杆菌时的技巧

破碎大肠杆菌用于提取表达外源蛋白,在使用超声波破碎仪之前,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后再破碎效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。

  细菌沉淀直接加样品1buffer,再加5μl的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。在表达重组蛋白后用超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,zui后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。

1、会产生气泡是因为你的探头位置没放好。超声波破碎仪探头一定要接近底部,约1cm(推荐是距底部0.5mm)。功率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。  

2、破3s停10s,破碎20-30个循环观察效果。

3、探头位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在使用超声波破碎时试着加大体积,振幅不要超过60%.  

4、尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,通常方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,zui好停顿时间稍长一些,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。如果换用Branson超声波破碎仪来进行工作,由于热耗较小,停顿周期可适当减小。

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